通用型 ECL 顯色試劑盒

增強型 ECL 化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。其原理是，蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以一抗及 HRP 標(biāo)記的二抗結(jié)合膜上的目的蛋白，或以HRP 標(biāo)記的探針直接或間接結(jié)合膜上的核酸。洗膜后用本產(chǎn)品配制的 ECL 工作液，室溫孵育膜數(shù)分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于 X 光片曝光暗盒。然后轉(zhuǎn)入暗室將 X 光膠片壓在膜上曝光數(shù)秒到數(shù)小時，顯影定影后蛋白質(zhì)或核酸條帶可清晰顯示在 X 光膠片上。

產(chǎn)品組分

A 液

B 液

運輸與保存方法

常溫運輸。頻繁使用可置于室溫保存，一年穩(wěn)定；長期不用，建議置于 4 oC 保存延長效期。【注】：A 液需避光保存！

操作方法（以 X 光膠片為例）

 1. 執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP 標(biāo)記抗體或者 HRP 標(biāo)記核酸探針孵育、洗膜。【注】：ECL 發(fā)光液是 HRP 的顯色底物，因此檢測系統(tǒng)最終必須基于 HRP 酶標(biāo)記抗體或者核酸探針。 

2. 最后 1 次洗膜的同時，新鮮配制發(fā)光工作液（推薦 100-200 μL 發(fā)光液/cm2 膜）：分別取等體積的 A 液和B 液，混勻備用。【注】：取 A 液和 B 液一定要用不同的槍頭；另建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。 

3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜全干燥。用移液器將工作液加到膜上，使之充分接觸。室溫孵育 1-2 min，準(zhǔn)備立即壓片曝光。4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余液體，留下少量工作液，不可讓膜全干燥。 

5. 在 X 光膠片暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來全包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。

 6. 暗房內(nèi)取一張 X 光膠片至于包裹的膜上，壓片，曝光 30 sec-2 min，顯影定影沖洗。【注】：曝光時間需根據(jù)曝光強度做相應(yīng)的調(diào)整。若是背景過高，可使用兩張 X 光膠片同時壓片。 

曝光方法 

使用 CCD 拍照：可以將膜放置于工作液中，開機后按照使用說明，將膜取出，進(jìn)行拍照。另外，也可以根據(jù)情況，調(diào)整機器測量參數(shù)，提高信噪比。 

注意事項 

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

2）轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育都需要避免氣泡，另外戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。 

3）長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。 

4）某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜

5）避免將多張膜置于同一個洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。 

6）使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。 

7）使用生物素-親和素系統(tǒng)，避免使用牛奶封閉，可能會導(dǎo)致背景過高。 

8）金屬氧化物顆粒可能會造成膜上出現(xiàn)顆粒狀斑點，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。

 9）疊氮*鈉（NaN3）能抑制 HRP 活性，若回收 HRP 標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%。 

10）本品無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。11) 本產(chǎn)品僅作科研用途!

問題與解決方案

上海牧榮生物科技有限公司

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